GB4789.4-2024沙門氏菌檢驗新標準修訂內容詳解

發布時間： 2024-04-08　　點擊次數： 37次

2024-03-12衛健(jian)委(wei)食品(pin)安全標準(zhun)(zhun)與監測評(ping)估司終于(yu)揭開了(le)《GB4789.4-2024 食品(pin)微生物學檢(jian)驗(yan) 沙門氏菌檢(jian)驗(yan)新標準(zhun)(zhun)》神秘面紗，該(gai)標準(zhun)(zhun)將(jiang)于(yu)2024年08月08日實施，相較于(yu)之(zhi)前(qian)的(de)GB 4789.4 -2016標準(zhun)(zhun)，新標準(zhun)(zhun)在設備和(he)材(cai)料(liao)、培養基和(he)試劑、檢(jian)驗(yan)程序和(he)操作(zuo)步驟等(deng)方面都進行(xing)了(le)修改和(he)完善(shan)。這些變化不僅提高了(le)檢(jian)驗(yan)的(de)準(zhun)(zhun)確性和(he)可(ke)靠性，也(ye)更好地適應了(le)食品(pin)行(xing)業的(de)發(fa)展需(xu)求。

而這(zhe)些(xie)變化具體是(shi)怎(zen)樣的？下面小編(bian)和(he)大家一起來一一盤點分(fen)析：

章節	新標準變(bian)更內容	看點分析
設備和材料變更情(qing)況(kuang)	冰箱溫度(du)范圍由2-5℃修改為“2-8℃"	因為冰箱冷藏室(shi)的溫度一般在2-8℃之間，修(xiu)改后更符合(he)大多數(shu)實驗室(shi)設(she)備條(tiao)件要求。
	增加“恒溫裝(zhuang)置"溫度范圍“42℃±1℃、48℃±2℃"	這(zhe)“恒(heng)溫(wen)裝(zhuang)置(zhi)"小編理解是恒(heng)溫(wen)水浴鍋或者恒(heng)溫(wen)電熱箱(xiang)這(zhe)類儀器用于培養(yang)基(ji)或樣品(pin)保(bao)溫(wen)使用，“42℃±1℃"這(zhe)是沙門氏(shi)菌(jun)(jun)檢驗中選擇性增菌(jun)(jun)用的培養(yang)溫(wen)度(du)范圍，其實(shi)這(zhe)溫(wen)度(du)范圍放在“恒(heng)溫(wen)培養(yang)箱(xiang)"那更合(he)適。
	增加“無(wu)(wu)菌(jun)量(liang)(liang)筒：容(rong)量(liang)(liang)50mL、無(wu)(wu)菌(jun)均質杯(bei)、無(wu)(wu)菌(jun)均質袋、無(wu)(wu)菌(jun)廣口瓶：容(rong)量(liang)(liang)500mL、無(wu)(wu)菌(jun)試管：15mmX150mm、18mmX180mm、無(wu)(wu)菌(jun)接種(zhong)環：10L（直徑(jing)約(yue)3mm）、1L以及接種(zhong)針"	對檢驗(yan)用(yong)器具規格明確，方便實驗(yan)室選用(yong)
	增(zeng)加“生物安全柜"	由于沙門氏(shi)菌2023版(ban)《人間傳(chuan)染的病原微生物(wu)(wu)目錄(lu)》中在危害程度分類為第三類，對于實(shi)驗(yan)室開展活菌操作、樣本(ben)檢測實(shi)驗(yan)室生物(wu)(wu)安(an)全(quan)等級需(xu)“BSL-2"，因(yin)此(ci)，增加此(ci)設備是生物(wu)(wu)安(an)全(quan)必須。
培養基試(shi)劑(ji)	增(zeng)加“氯(lv)化鎂孔雀綠大豆胨(RVS)增(zeng)菌液" ，刪除“亞xi酸鹽胱氨酸（ＳＣ）增(zeng)菌"	參考美國(guo)FDA BAM Chapter5、ISO6579-1：2017、AOAC等國(guo)外(wai)標準(zhun)用 RVS 代替 SC 作為食品中沙門氏菌檢(jian)驗的(de)選擇性增菌液，降(jiang)低培養(yang)基(ji)對實驗人員危害的(de)風險。
	增(zeng)加“營養瓊脂(NA) "	用于可疑沙門氏菌的純培養。
	四硫(liu)磺酸(suan)(suan)鈉煌綠增菌(jun)液(TTB)成分用量不變，但pH由“7.0±0.2"修改為“7.6±0.2"；滅(mie)菌(jun)條件從(cong)“高壓(ya)滅(mie)菌(jun)121℃20min"修改為“煮沸,無須(xu)高壓(ya)滅(mie)菌(jun)"；牛(niu)膽鹽溶液使用牛(niu)膽鹽粉(fen)替代(dai)(dai)，硫(liu)代(dai)(dai)硫(liu)酸(suan)(suan)鈉溶液使用硫(liu)代(dai)(dai)硫(liu)酸(suan)(suan)鈉粉(fen)末替代(dai)(dai)。	由(you)于(yu)TTB配(pei)(pei)方含4%碳酸鈣，因而(er)該培養基pH偏堿性，通常是(shi)(shi)7.6±0.2，其實也很難(nan)人為調(diao)整(zheng)至(zhi)pH7.0±0.2的范(fan)圍內，而(er)且(qie)pH7.6±0.2也是(shi)(shi)沙門氏菌(jun)的最(zui)適生(sheng)(sheng)長(chang)范(fan)圍內，同時能抑制不耐堿的雜菌(jun)生(sheng)(sheng)長(chang)。該培養基抑菌(jun)強，因此，不滅菌(jun)也不影響使用，且(qie)簡化(hua)配(pei)(pei)制節省時間。
	其(qi)他培養基只是一(yi)般性修(xiu)(xiu)改(gai)，如(ru)“牛肉膏"修(xiu)(xiu)改(gai)“牛肉浸粉(fen)，“酵母(mu)膏"修(xiu)(xiu)改(gai)為(wei)“酵母(mu)浸粉(fen)"，以及pH測定統一(yi)為(wei)滅菌(jun)后25℃測。	培(pei)養基(ji)試(shi)劑配方配制更加規范(fan)。
	其(qi)他	關于緩(huan)沖蛋白胨(dong)水(shui)(shui)、TTB、RVS、三糖鐵(tie)瓊脂(zhi)等配(pei)方(fang)中(zhong)(zhong)無機(ji)鹽含(han)(han)結晶水(shui)(shui)與不含(han)(han)結晶水(shui)(shui)的用量修正(zheng)處理，ISO6579-1：2017有說明。如，緩(huan)沖蛋白胨(dong)水(shui)(shui)標準配(pei)方(fang)中(zhong)(zhong)磷酸(suan)氫二鈉(na)含(han)(han)12分子結晶水(shui)(shui)用量9g/L，如用無水(shui)(shui)磷酸(suan)氫二鈉(na)使用3.57g/L。
檢驗程序(xu)圖	選擇性(xing)增菌用RVS替代了SC培養基(ji)，接種量1mL修(xiu)改為(wei)0.1mL；	參考美國(guo)FDA BAM Chapter 5、ISO6579-1：2017國(guo)外(wai)標準(zhun)修(xiu)改。
	TTB培(pei)養溫(wen)度(du)從之前的42℃變更為“36±1℃或42±1℃"	根據樣品的背景菌含量選擇培(pei)養溫度，，可以有效(xiao)的防止漏篩(shai)
	調(diao)整可疑(yi)菌落初篩流程	流程(cheng)圖更清晰易懂(dong)。
操(cao)作步驟(zou)-預增菌(jun)	增加“對(dui)于(yu)(yu)乳粉,無菌操作稱(cheng)取(qu)25g樣品(pin),緩緩傾倒在廣口(kou)瓶或均質袋內(nei)225mLBPW 的液體(ti)表(biao)面,勿調節pH,也暫不混(hun)(hun)勻,室(shi)溫靜(jing)置(zhi)60min±5min后再混(hun)(hun)勻,置(zhi)于(yu)(yu)36℃±1℃培養16h~18h。"	因為乳(ru)粉(fen)是經過高(gao)溫噴(pen)霧干燥(zao)的(de)(de)產品，其中的(de)(de)沙門氏(shi)菌(jun)一般處(chu)于(yu)受(shou)損(sun)狀態。乳(ru)粉(fen)在BPW中室(shi)溫浸泡(pao)1小時緩(huan)慢水(shui)化，這樣有助(zhu)于(yu)受(shou)損(sun)的(de)(de)沙門氏(shi)菌(jun)逐(zhu)漸復(fu)蘇，之后(hou)再進行(xing)預增菌(jun)操作，可以更好地保證檢驗結果的(de)(de)可靠性。
操(cao)作步驟(zou)-預增菌(jun)	增加“對冷凍樣品可以采用(yong)在40℃～45℃的(de)水(shui)浴中解凍不(bu)超過(guo)15min，或在2℃～8℃冰箱中緩慢化(hua)凍，但(dan)需要(yao)主要(yao)化(hua)凍時(shi)間(jian)不(bu)超過(guo)18h。"	操作(zuo)更(geng)細化更(geng)完善
操作步(bu)驟-選擇性(xing)增菌	將(jiang)之前的"增菌"步驟改成(cheng)了"選擇(ze)性增菌	更加的準(zhun)確
	將(jiang)SC更換(huan)成RVS培養基(ji)，接種量從之前的(de)1mL改成了現在的(de)0.1mL	RVS弱選擇性，減少(shao)接種量減少(shao)雜(za)菌干擾
	接(jie)種后TTB的(de)(de)培(pei)養溫度根據樣品(pin)(pin)的(de)(de)含菌(jun)量來進行區(qu)分，低(di)背景(jing)(jing)菌(jun)的(de)(de)樣品(pin)(pin)(如深(shen)加工的(de)(de)預包裝食品(pin)(pin)等)置于(yu)36℃±1℃培(pei)養18h~24h,高背景(jing)(jing)菌(jun)的(de)(de)樣品(pin)(pin)(如生鮮(xian)禽肉等)置于(yu)42℃±1℃培(pei)養18h~24h"	培養溫度選擇(ze)更(geng)精(jing)準，有利于降低雜菌量(liang)，提高檢(jian)出率
	新(xin)增“如有需要(yao)，可將預增菌的培(pei)養物在2-8℃冰(bing)箱(xiang)保存(cun)不超過72h，再進行選擇性增菌"	操(cao)作更靈(ling)活，大大降(jiang)低了周末(mo)加班的(de)需求(qiu)
分(fen)離	補(bu)充劃(hua)線前“振蕩(dang)混勻選擇性增菌(jun)的培(pei)養物"	細(xi)節描(miao)述更加詳細(xi)清(qing)楚，規范化操作(zuo)
分(fen)離	新增“如有(you)需要，可(ke)將選擇性增菌的培養物在2-8℃冰箱(xiang)保(bao)存(cun)不超過72h，再(zai)進行分離"	操作(zuo)更靈(ling)活(huo)，大大降低了周末加班的(de)需(xu)求
生(sheng)化試驗	可疑(yi)菌(jun)(jun)落(luo)挑(tiao)選(xuan)數(shu)量 “2個以上典型或(huo)(huo)可疑(yi)菌(jun)(jun)落(luo)“修改為"4個以上典型或(huo)(huo)可疑(yi)菌(jun)(jun)落(luo)"	新標(biao)準詳細說明(ming)這些菌(jun)(jun)落(luo)宜分(fen)別(bie)來自(zi)不用(yong)的(de)(de)選擇性增菌(jun)(jun)液的(de)(de)不同分(fen)離瓊脂，也可以(yi)選擇其中(zhong)一個典型或(huo)者可以(yi)的(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)進行試驗（對于有經驗的(de)(de)實(shi)驗員可以(yi)大大降低其工作量）
	純化培養(yang)基營(ying)養(yang)瓊脂（NA）后面補充說明（或其他合適(shi)的非(fei)選擇性固體(ti)培養(yang)基）	也就是說，TSA、PCA這些非選擇行固體培養(yang)基可替代營(ying)養(yang)瓊脂。
	附錄A.12.3qing化(hua)鉀培(pei)養基(ji)試驗方法有修改“將待測菌(jun)(jun)(jun)的純培(pei)養物(wu)用生理鹽水配制(zhi)成0.5麥氏濁度的菌(jun)(jun)(jun)懸液,滴加(jia)2滴~3滴菌(jun)(jun)(jun)懸液于qing化(hua)鉀(KCN)培(pei)養基(ji),混勻后滴加(jia)一(yi)層無(wu)菌(jun)(jun)(jun)液體(ti)石蠟進行密封。另外滴加(jia)2滴~3滴菌(jun)(jun)(jun)懸液于對照培(pei)養基(ji)。在36℃±1℃培(pei)養24h~48h,觀察結果。qing化(hua)鉀(KCN)培(pei)養基(ji)內有細菌(jun)(jun)(jun)生長(chang)(chang)者為(wei)陽性(不抑制(zhi)),培(pei)養48h無(wu)細菌(jun)(jun)(jun)生長(chang)(chang)者為(wei)陰性(抑制(zhi))。"	明確接(jie)種(zhong)菌液濃度為(wei)“0.5麥氏濁度"，接(jie)種(zhong)量(liang)“2滴~3滴"，避免接(jie)種(zhong)量(liang)過大導致假陽性；還(huan)有增加＂接(jie)種(zhong)混(hun)勻后滴加一層無菌液體石(shi)(shi)蠟進行密(mi)封＂由于qing化(hua)鉀不(bu)穩定容易分(fen)解(jie)失效，因此，加石(shi)(shi)蠟密(mi)封避免造成(cheng)假陽性反應(ying)。
	“符(fu)合表3中A1者,為沙門氏菌(jun)典型的生(sheng)化(hua)反應"后面補充(chong)“進行(xing)血清學鑒(jian)定后報告結果(guo)"	明(ming)確的指(zhi)出(chu)符合沙(sha)門(men)氏菌典型的生化(hua)反應需要進(jin)行血清學(xue)鑒定后報告結果
	2016版(ban)“必要時按(an)表(biao)５進行(xing)沙(sha)門(men)氏菌生化群的(de)鑒定"修改為2024版(ban)中“必要時,按(an)表(biao)5進行(xing)沙(sha)門(men)氏菌種和(he)亞種的(de)生化鑒定"	“生化群"用(yong)“種和(he)亞(ya)種"替代(dai)，更易懂(dong)；
	在表5沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)種(zhong)和(he)亞(ya)種(zhong)的生化鑒定中(zhong)增(zeng)加“腸炎(yan)沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)、邦戈爾沙(sha)(sha)門菌(jun)種(zhong)名"以及腸炎(yan)沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)種(zhong)內對(dui)應(ying)(ying)的6個亞(ya)種(zhong)和(he)生化群分型"；生化反應(ying)(ying)項(xiang)增(zeng)加“明(ming)膠酶、L(+)-酒(jiu)石酸鹽、半乳糖醛(quan)等8項(xiang)"	表(biao)5 是在確定(ding)是沙(sha)門(men)氏菌屬(shu)基礎上(shang)再進一(yi)步(bu)鑒定(ding)至(zhi)種和亞種時使用，這一(yi)般高要求能力(li)驗證項目會用到(dao)，對于食品微生物限liang檢驗，鑒定(ding)到(dao)沙(sha)門(men)氏菌屬(shu)即可(ke)報告結果。
多價菌體抗原(yuan)(O)鑒定(ding)	Vi抗(kang)原去除的煮(zhu)沸操(cao)作修改為(wei)“在沸水中(zhong)水浴20min~30min"	操作更明確(que)
多價菌體抗原(yuan)(O)鑒定(ding)	增加(jia)備(bei)注“不(bu)同廠商(shang)沙門氏(shi)(shi)菌診(zhen)斷血(xue)(xue)(xue)清的(de)組(zu)成(cheng)、鑒定(ding)操作(zuo)及結果(guo)判斷,可(ke)能存在差異(yi)。使用商(shang)品化的(de)沙門氏(shi)(shi)菌診(zhen)斷血(xue)(xue)(xue)清進(jin)行血(xue)(xue)(xue)清學鑒定(ding)時,應遵(zun)循(xun)其產品說明。“	備注了不(bu)同(tong)廠商因為血(xue)清(qing)組(zu)成不(bu)同(tong)，可能存在差(cha)異，應以(yi)產(chan)品說明為準。
H 抗原的鑒(jian)定	2016版的(de)(de)“小倒(dao)管法"修改(gai)為(wei)(wei)2024版的(de)(de)“小套管法"，對半固體瓊脂的(de)(de)體積、小玻(bo)管的(de)(de)尺寸、接種后的(de)(de)培養溫度有了更為(wei)(wei)準確(que)的(de)(de)敘述；培養基(ji)的(de)(de)使用溫度從50℃改(gai)為(wei)(wei)48℃。	操作描述更(geng)詳細更(geng)嚴謹。

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GB4789.4-2024沙門氏菌檢驗新標準修訂內容詳解